1、金针菇选育技术
1.1金针菇的野生驯化育种
我国的金针菇资源丰富,东西南北均有分布。要获得优良的野生驯化种,必须采集不同地区、不同树木生长的野生金针菇进行组织或孢子分离,得到尽可能多的野生金针菇菌株,再把这些野生菌株放在相同培养基和相同环境条件下进行栽培,根据菌盖大小、色泽、菌柄粗细、菇蕾多少、绒毛有无、产量高低、生育期长短、抗病力强弱选育出符合要求的菌株,淘汰质量差的菌株。对筛选出来的野生菌株再经不断的人工,选择保持原菌株的优良特性,改变部分特性,就可以逐渐变成人工栽培品种。
1.1.1驯化育种步骤
1.1.1.1野生原菌株栽培试验 对采集的野生金针菇菌株进行栽培试验,研究其菌丝生长速度、出菇能力及形态、栽培特点,从中选出较优的野生金针菇菌株。
1.1.1.2严格选择种菇 进行再分离从较优的野生金针菇菌株子实体中选择出菇早、菇蕾多、菌柄长、色泽较好、开伞较慢的种菇作为分离材料,采用髓部、菌肉和孢子分离三种方法再分离。
1. 1. 1.3稳定性考察 从上述再分离的金针菇菌株的栽培过程中筛选出优良菌株,并经多次栽培试验,最后确定优良的野生驯化菌株。
1. 1.1.4对照菌株比较 把驯化选育出的优良菌株与国内外引进菌株进行对照试验。笔者等先后经过四代选择和三年稳定性考察,从分离的各菌株中选育出优于其他野生驯化菌株和国内外引进菌株的“三明1号”优良菌株。
1. 1.2“三明1-号”菌株与原野生菌株生产性状比较
1. 1.2. 1产量 原始野生菌株于1974年由黄年来先生从三明市洋山枯枝上分离,当年栽培产量20g/瓶。经孢子和组织分离后于1979年栽培达80g/瓶;又经髓部分离、筛选后,1982年产量达145g/瓶,250g/袋,优于本所其他野生菌株,也优于供对照的中科院微生物所、河北和山西生物所、广东微生物研究所提供的野生菌株及供对照的日本“信浓2号”菌株。其生物学效率达80 以上。
1.1.2.2形态 原三明野生金针菇子实体形态:子实体15-18朵;菌盖直径1.5~3.4cm,金黄至黄褐色;菌柄长度2-- 4cm,粗0.5cm, 上端金黄色,基部为褐色,绒毛多(图1)。
第一次三明野生金针菇菌株栽培特征:菌盖金黄色,直径1.5 ~2.0cm;菌柄长度参差不齐,长的9cm,短的3cm ;菇蕾数少;基部褐色有绒毛。
“三明1号”菌株形态特征:子实体丛生,每丛约为100朵以上;菌盖早期呈半球形,淡黄色至金黄色,直径为1一2cm,菌盖厚度0.2cm,中央稍厚,边缘渐薄开展;菌柄圆柱状,长为10一15cm,直径0.3一0.4cm,基部色泽为金黄色至浅褐色(图2)。
1. 1.3“三明1号”栽培特点
“三明1号”菌株在光线明亮、温度高、湿度大的条件下,菌盖极易开伞,菌柄易变褐色。所以,栽培时必须注意在黑暗条件下尽量降低栽培室温度;在栽培袋上覆盖无纺布或1一2丝的薄膜以提高二氧化碳浓度,就可以抑制菌盖开展,子实体保持金黄色至黄白色。在温度升高情况下,相对湿度必须适当降低至85 左右,即可减少因含水量高引起的腐烂现象,从而提高产品质星。
“三明1号”菌株经专家确认具有产量较高、菌柄脆嫩、抗病力强、栽培周期短的特点适宜在我国自然条件下栽培。80年代初期它已作为我国开发金针菇新品种的优良菌株在各地推广,而且至今仍是北方寒冷地区栽培的优良品种之一。笔者认为,我国的金针菇资源十分丰富,驯化育种是金针菇育种中一种简单而有效的方法,它能选育出适合我国当地栽培、产量高、风味特别又相似于野生金针菇的优良菌株。
1. 2杂交育种
杂交育种手段繁琐,但它是目前培育新的优良菌株的真正有效方法。金针菇是异宗结合的食用菌,可利用不同性别的单核菌丝进行杂交,其杂交方法有多孢杂交和单孢杂交两种
1.2.1多孢杂交
在自然界中,单孢杂交机会不多,大多数的野生食用菌是由多孢杂交产生的,其菇形圆整,几乎无畸形菇,抗病力强,后代有很强的优势。由于金针菇产生的无性粉孢子容易干扰杂交工作,因而可采用多孢杂交进行金针菇的杂交育种。该法是在人工控制条件下,选用两个特定的具有不同遗传特征的菌株,让其担孢子在同一时间内快速自由杂交,然后及时挑选杂交菌丝,可尽量排除粉孢子干扰。同I时,由于金针菇容易在培养从上形成子实体,因而是否发生杂交和发生基因重组容易辨认。笔者根据金针菇特性,在育出“三明l号”的墓础上,于1984年开始以日本“信浓2号”为父本,“三明1号”为母本,采用多孢杂交法进行金针菇育种。经多年栽培研究,于1986年选育出国内第一批杂交优良菌株。其中“杂交19号”是具有双亲优良特性的一株高产优质、栽培性状稳定的优良杂交菌株,多年来一直是全国各地大而积栽培的当家品种。之后,上海农科院食用菌所也采川担孢子多孢杂交法育出新的杂交菌株。多孢子杂交育种步骤如下。
1.2.1.1选择亲本菌株 亲本菌株必须具有优良菌株某些特性。如选择亲本甲菌株共有菌盖内卷、开伞慢、菇体白的特征;选择乙菌株时,必须选择出菇快、产量高、抗病力强的特征,以便使甲、乙菌株通过杂交具有互补性。同时,两亲本菌株必须具有远缘性,这是能否获得优良菌株的关键。
1.2.1.2多孢杂交操作法 采用担孢子同时弹射法进行两亲本的多孢杂交。该法相似于自然界中的多孢杂交,只是两亲本菌株是经过选择的特定菌株。
1.2.1.3挑取菌落 及时挑取各种类型菌落,包括由于拮抗作用而被明显分割成各小区的菌落和菌丝生长旺盛的菌落。
1. 2. 1. 4出菇试验及子实体分离 进行出菇试验,挑选各袋中产量高、质量好的子实体进行分离。
1. 2. 1. 5对峙反应 分离的菌株首先进行菌株间的对峙反应,弃除相同类型的菌株,之后再与两亲本菌株进行对峙反应,选择同时存在拮抗作用的菌株。该试验的工作量大,但作为多孢杂交育种的初筛,确是必不可少的步骤。经对峙反应后选择的菌株即为杂交菌株。
1. 2. 1.6杂交菌株出菇试验 进行杂交菌株的出菇试验,考察其菌丝生长速度、出菇快慢、菇蕾数量、子实体性状、产量及抗病力强弱。
1.2.1.7选出优良菌株并进行稳定性 考察经上述试验筛选出各项指标均较好的优良菌株,再进行2一3次稳定性考察。
1.2.1.8优良杂交菌株鉴定 进行了形态鉴定、对峙反应鉴定(图3)、同功酶鉴定(图4)。这三项指标的综合鉴定可以证明选育出来的优良菌株是否系不同于亲本的新杂交菌株。
多孢杂交获得的菌株,实际上是单孢(甲)X单(乙);双核(甲)X单(乙);双核(乙)X单(甲)的杂交异核体菌株。该菌株相当于微生物杂交获得的异核体或高等植物的杂种子一代。根据对食用菌子实体进行组织分离可以保持遗传稳定的特性,对杂种子一代的金针菇子实体进行组织分离即可获得得稳定的杂交菌株。笔者第一批多孢杂交获得的“杂交19号”、“杂交4号”菌株;第二、三批多孢杂交选出的“杂交66”等菌株经多年试验均为稳定、高产优质的优良菌株。
1.2.2“杂交19号”菌株种性及栽培特点
1.2.2.1形态特征 子实体形态近于甲、乙两亲本之间。菌盖自至淡黄色,直径0.5- 1.5cm菌肉厚0.3cm,稍内卷;菌柄粗细均匀,0.2-0.3cm,长度15cm以下,整体呈白色,15cm以上时,基部1/5处逐渐变淡黄色;过于成熟时,基部呈淡褐色。菌柄稍有光泽,几乎无绒毛。菇形圆整,无畸形菇,极少扭曲,属细密形(图5)。
1.2.2.2种性菌丝生长速度快、出菇快、栽培周期短,从接种至出菇只需32d,完成栽培周期仅需35一50d。产量高,采用高产配方,生物学效率可达100 以上。适应性广,南北方均可栽。子实体发生适温10-15℃,生长适宜温度4 -18 ℃,在21-23℃时尚能耐2-3d高温,气温下降后生长正常。抗高温能力比日本菌株强,且种性稳定。
1.2.2.3栽培管理特点 催蕾时,要求较大的通气量,必须经常掀开覆盖物,可使菇蕾长满培养基表面。保持黑暗,子实体呈白至淡黄色。低温并控制好湿度,可使子实体圆整、结实、不易开伞、白色或淡黄色。
1.2.3单孢杂交
金针菇菌丝产生的粉孢子容易干扰杂交工作,因而在进行不同性别的单孢杂交时,必须排除无性粉孢子的干扰,以获得真正的单孢杂交菌株,这点在金针菇的单孢杂交育种中是很重要的。经过单孢配对后获得的杂交菌株优劣必须通过栽培试验才能确定。具体操作步骤与香菇单孢杂交育种相似。
其中还须注意的是,在挑取甲、乙两亲本单核菌丝配对的异核体菌丝时,需挑取中间接触部位的菌丝、靠近甲单核菌丝部位的菌丝及靠近乙单核菌丝部位的菌丝。上述三种位置挑取的异核体菌丝虽然来自同样的甲、乙两个单孢子,但栽培的结果是不同的。这个问题也是香菇、平菇等四极性异宗结合的食用菌单孢杂交时需注意的。
另据介绍,用可以出菇的单核菌丝作为亲本进行杂交试验,可以得到产量高、出菇快的金针菇新菌株。潘保华等进行了金针菇单孢结实性的研究,已经单孢结实性菌株与非单孢结实性菌株交配选出6个强优组合菌株。
1.2.4诱变育种
诱变育种也是选育优良菌株的一种方法。笔者曾用15W(2537Å)的紫外线诱变菌丝体,获得优于原菌株的金针菇诱变菌株。中国农科院植保所以“三明1号”为亲本菌株,用60Co-γ射线诱变金针菇原生质体选育出“F8815”和“F8817”菌株;北京农科院植保环保所以“杂交19号”作为诱变出发菌株,经担孢子紫外线诱变,单核菌丝体杂交培育出“F9309”和“F9321”菌株,据报道,产量均比原亲本菌株高。
2、金针菇品种的选育方向
在我国,金针菇已成为大众饭桌上的美味佳肴。而且因为黄色金针菇菌柄脆嫩,风味好,因而人们更习惯和喜欢食用黄色金针菇。随着金针菇数量的不断增加,人们对其质量必将提出更高要求,因此选育菌盖内卷、开伞慢;菌柄白至淡黄色、不易褐变、基部无绒毛;脆嫩而又有芬香味,外观质量好并容易保存的优良菌株已成为我国金针菇品种的选育方向之一。
但在国际市场上,因为长久以来日本的金针菇产品首先占领市场的缘故,因而习惯上喜欢食用白色金针菇。所以选育出能在我国南、北方自然条件下栽培、产量高、抗病、抗高温能力强的白色金针菇优良菌株是育种方向之二。
另外,选育温度适应范围广,特别是在20-30℃的高温情况下尚能正常生长、产量高、质量又好的金针菇高温菌株也是今后育种的方向。