秀珍菇液体菌种制备技术
一、工艺流程
母种→原种(液体摇瓶)→生产种(罐体发酵)→料棒接种
二、母种的制备
1、母种培养基配方
马铃薯(去皮)20%，葡萄糖2%，琼脂2%，水1 000毫升，pH值5.5～6。
2、母种的制备及注意事项
按配方准确称取原料，加热煮沸最后定容，分装试管，装入量约为试管长度的1/4～1/5，塞好棉塞。使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌半小时，注意一定要放净高压灭菌锅内的冷空气。灭菌后，待培养基温度下降至60℃时，将成把的试管摆成斜面。注意，不要让培养基粘湿棉塞。
要严格按照无菌操作规程进行接种，然后置于恒温箱中25℃左右恒温培养10～15天。
三、原种的制备
1、原种培养基配方
马铃薯(去皮)20%、麦麸3%、葡萄糖2%、蛋白胨3‰、磷酸二氢钾2‰、硫酸镁1‰。
2、原种的制备及注意事项
马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，加入其它原料，全部溶解后装入三角瓶。三角瓶在使用前除清洗之外，还要进行空灭，灭菌方法与常规灭菌试管培养基相同。每个瓶中放入5～10粒玻璃球(直径0.5cm)，用棉塞塞紧瓶口，再用牛皮纸包裹后扎紧。使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌45分钟。
冷却后进行无菌接种，然后置于25℃恒温培养箱中静置培养72小时。摇床培养时，温度25℃，转速140转/分钟，培养时间72～96小时。
四、生产种的制备
1、生产种培养基配方
马铃薯(去皮)20%、麦麸2%、蛋白胨3‰、葡萄糖2%、磷酸二氢钾1‰、硫酸镁0.5‰、石膏0.5‰、琼脂2～3g、酵母膏0.5‰、消泡剂1‰。
2、生产种的制备
(1)清洗罐体
发酵罐在每次使用后都必须进行彻底的清洗，去除罐内残存的菌球、菌块料液等杂物，保证罐内洁净。
(2)配制原料
按照生产种培养基配方准确称取各种原料。马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，再加入其它原料及消泡剂。
(3)灭菌
将盛有培养基质的发酵罐推进灭菌仓，通入蒸汽进行灭菌，控制温度在121℃左右、压力为0.11Mpa，灭菌1个小时。
(4)冷却
培养基灭菌完毕后，开启灭菌仓，将发酵罐推进冷却室进行降温，当温度降至25℃时即可进行接种操作。
(5)接种
将发酵罐推到层流罩下，先用酒精喷灯发酵罐接种口消毒，再迅速打开原种瓶并用喷灯将瓶口消毒，打开接种口阀门，将菌种注入发酵罐，然后迅速关闭接种阀门。
(6)恒温培养与观察
接种结束后将发酵罐推到培养区，连接通气阀等。通过进气阀和排气阀将通风量调节至1：0.5V/V～1.2V/V(料液体积/空气体积)。调节罐压保持在0.02Mpa～0.04Mpa。培养温度控制在25℃左右。
接种24小时以后，每隔12小时可从接种口取样1次，观察菌种萌发和生长情况。采用显微镜，低倍、高倍、油镜，观察菌丝生长状况和有无杂菌污染，发现异常及时处理。
菌种恒温培养7天左右即可使用接种栽培袋。如果液体生产种不能立即使用，可以在12～15℃条件下暂时保存2～3天。(来源：菌农网)
